Responsable: Fatima Domínguez Timón - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Responsable: Inmaculada Gude Rodríguez - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

El laboratorio de bioanalisis está dotado de equipos para la extracción, prepurificación y cuantificación y/o identificación de moléculas de pequeño tamaño.

 

La unidad de bioanalisis ofrece servicio a los miembros del CBGP a precio de coste. Los servicios ofrecidos cubren la cuantificación absoluta de compuestos de interés, como metales, hormonas vegetales, aminoácidos, carbohidratos y sus derivados.

Responsable: Fatima Domínguez Timón - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Supervisor científico: Manuel González-Guerrero - Catedratico/a de Universidad
manuel.gonzalez@upm.es 910679135 - 910679134 ( 279 )

FORMULARIO DE RESERVA

 

contrAA 800 D – Equipo combinado para la técnica de llama y de tubo de grafito

El contrAA 800 es un espectrómetro de absorción atómica con fuente continua de alta resolución para la tecnología de llama y de tubo de grafito. Se utiliza para la determinación secuencial de trazas de metales y no metales en muestras líquidas y diluidas. En combinación con un automuestreador, el contrAA 800 se puede utilizar como autómata multielemento en la analitica de rutina.

 

Sistema tubo de grafito


El automuestreador AS-GF
se utiliza en la tecnología de tubo de grafito para la alimentación de muestras líquidas. El automuestreador AS-GF absorbe volúmenes definidos de distintas soluciones y los deposita en el tubo de grafito. Permite añadir hasta cinco modificadores a la solución de muestra, trasladar la solución de muestra para el tratamiento térmico previo en el tubo, enriquecer las muestras, depositar componentes en el tubo precalentado, trasladar por separado componentes con lavado intermedio, crear automáticamente soluciones patrón a través de la dilución o la clasificación de volúmenes, diluir muestras de forma predefinida o inteligente y realizar un análisis de múltiples elementos de forma totalmente automática.

En la unidad de Bioanálisis disponemos de protocolos para la determinación de Fe, Cu, Zn, P y Mo. Para otras determinaciones, consultar previamente.

 

Sistema de llama


La espectroscopia de absorción atómica de llama se utiliza para determinar elementos traza en el rango de concentración de µg/L a mg/L y de componentes principales. Requiere una llama con propiedades constantes. Además, la composición de la llama se tiene que adaptar al respectivo elemento.


El contrAA 800 D puede trabajar con los siguientes tipos de llama y mecheros correspondientes:

  1. Llama de aire-acetileno con mechero de una sola rendija de 50 mm
  2. Llama de óxido nitroso-acetileno con mechero de una sola rendija de 50 mm. (no disponible)

La llama de aire-acetileno se puede utilizar para la mayoría de los elementos.


El automuestreador permite el funcionamiento automatizado en el análisis multielemento. Con el software de control ASpect CS se pueden ajustar los parámetros para la alimentación de las muestras. El automuestreador AS-FD es automático y dispone además de una función de dilución. Tiene un plato de muestras con 54 posiciones para recipientes de 50 mL

 

Responsable: Inmaculada Gude Rodríguez - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Supervisor científico: María Garrido Arandia - Profesor/a Contratado/a Doctor/a
maria.garrido@upm.es 910679129 ( 151/S78)

FORMULARIO DE RESERVA

 

MicroCal PEAQ-ITC

El sistema MicroCal PEAQ-ITC es un calorímetro de titulación isotérmica altamente sensible de bajo volumen para el estudio de interacciones biomoleculares libre de marcadores en una solución. Permite realizar una medición directa de todos los parámetros de enlace en un solo experimento y puede analizar enlaces con afinidad leve o alta.


 

 

Información general


El sistema MicroCal PEAQ-ITC tiene una sensibilidad excepcional. El sistema mide directamente el calor que se libera o se absorbe durante los eventos de enlace bioquímico, del que se calcula la afinidad de enlace (KD), la estequiometría (n), la entalpía (ΔH) y la entropía (ΔS). Con optimización del sistema y una mínima preparación de la muestra, se generan los datos de un modo rápido y sencillo. La amplia gama de afinidad permite el análisis de aglutinantes con afinidad leve o alta con una excepcional reproducibilidad.

Se puede investigar una amplia variedad de aplicaciones con MicroCal PEAQ-ITC, entre las que se incluyen caracterización de interacciones moleculares de moléculas pequeñas, proteínas, anticuerpos, ácidos nucleicos, lípidos y otras biomoléculas. También puede utilizarse para medir la cinética enzimática.

Cómo funciona


Los microcalorímetros de titulación isotérmica miden el cambio de calor que se produce cuando interactúan dos moléculas. El calor se libera o absorbe como resultado de la redistribución y formación de enlaces no covalentes cuando las moléculas que interactúan pasan de estado libre a enlazadas. El ITC supervisa estos cambios de calor mediante la medición del diferencial de potencia que se aplica a los calentadores de celdas, necesarios para mantener en cero la diferencia de temperatura entre la celda de referencia y la celda de muestra cuando se mezclan los componentes de enlace. La celda de referencia por lo general contiene agua, mientras que la celda de muestra contiene uno de los componentes de enlace (la muestra, a menudo, pero no necesariamente una macromolécula) y una jeringa de agitación que contiene el otro componente de enlace (el ligando). El ligando se inyecta en la celda de muestra, por lo general en pequeñas alícuotas de 0.5 a 2 μL, hasta que la concentración del ligando sea 2 o 3 veces mayor que la de la muestra. Cada inyección de ligando da como resultado un pulso de calor que se integra con respecto al tiempo y se normaliza para la concentración para generar una curva de titulación de kcal/mol en comparación con la relación molar (ligando/muestra). El isotermo resultante se ajusta a un modelo de enlace para generar afinidad (KD), estequiometría (n) y entalpía de interacción (ΔH).







 
ITC-TEORIA Y PRACTICA

 

Responsable: Inmaculada Gude Rodríguez - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Supervisor científico: Antonio Molina Fernández - Catedratico/a de Universidad
antonio.molina@upm.es 910679213 - 910679201 ( 235)


FORMULARIO DE RESERVA


Sistema HPIC Dionex ICS-6000


El sistema de cromatografía Dionex ICS 6000 es un sistema compacto, modular y versátil, preparado para llevar a cabo todo tipo de separaciones de intercambio iónico isocráticas y con gradiente. Todo el sistema es inerte y libre de metales, de esta manera no hay nada metálico que esté en contacto con la muestra o el eluyente permitiendo trabajar a pH extremos. Es un sistema de alta presión diseñado para la determinación de iones y moléculas cargadas en diversas aplicaciones.


 

 

SISTEMA DE ALIMENTACIÓN DE ELUYENTE AL EQUIPO


El sistema Dionex ICS-6000 incorpora un sistema de bombeo cuaternario de doble pistón y alta presión con desgasificación interna por vacío. Tiene capacidad de realizar gradientes de distinta concentración ilimitados de hasta cuatro fases móviles diferentes

 

MODULO AUTOMUESTREADOR


Dispone de un automuestreador para 50 viales de 5 mL y/o de 0,5 mL (disponibles en la unidad de bioanálisis), que incorpora un sistema de filtración de muestras vial a vial, que dispone de tapones y filtros individuales para cada vial, para evitar contaminaciones cruzadas.

MÓDULO DETECTOR


El sistema incorpora un horno de columnas que permite calentar las columnas (guarda y analítica) en un rango de temperaturas desde 10°C hasta 70°C (mínimo 5 por encima de la temperatura ambiente). La unidad de bioanálisis dispone de columnas CarboPac PA1, PA20 y PA100.

Además, el compartimento de los detectores puede trabajar en un rango de temperatura de 18 a 40°C para potenciar la señal de los analitos y mejorar la sensibilidad.

El detector electroquímico contiene un electrodo de Au, importante para el análisis de iones inorgánicos, de carbohidratos y la determinación de contaminantes.

 

APLICACIONES


El sistema Dionex ICS-6000 HPIC es un equipo de cromatografía de intercambio iónico de alta presión diseñado para separar y cuantificar iones y moléculas cargadas en diversas aplicaciones, desde el análisis de agua y aguas residuales hasta la investigación biológica y estudios medioambientales.

 

 

Responsable: Inmaculada Gude Rodríguez - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Supervisor científico: Araceli Díaz Perales - Catedratico/a de Universidad
araceli.diaz@upm.es 910679129 ( 151/S78)

FORMULARIO DE RESERVA

 

Sistema HPLC Agilent (1260 Infinity II Quaternary System)

El LC 1260 Infinity II es un HPLC versátil que ofrece la mayor funcionalidad y conveniencia operativa para HPLC analítica y preparativa.

La bomba cuaternaria Agilent 1260 Infinity II es ideal para una amplia gama de aplicaciones y columnas. La formación de gradientes cuaternarios con mezcla a baja presión, la convierten en la bomba ideal para aplicaciones que requieran máxima flexibilidad en la combinación de disolventes, y también para separaciones por UHPLC (incluyendo el uso de columnas STM) para reducir tiempos de análisis en más de un 70%. Con presión máxima 600 bares, desgasificador de vacío para cuatro canales y velocidades de flujo de hasta 5 ml / min. Permite el solapamiento de inyecciones para aumentar la productividad.

 

El compartimento de columnas tiene dos zonas independientes termostatizadas por Peltier. Posibilidad de precalentamiento del disolvente en la precolumna. Con un rango de temperatura de 10⁰C por debajo de temperatura ambiente (mínima de 4⁰C) hasta 85⁰C. La unidad de bioanálisis dispone de una columna Poroshell 120 EC-C18.

El sistema 1260 Infinity II dispone de dos detectores:

 

  1. Detector ultravioleta/visible de longitud de onda variable y programable. Fotómetro de doble haz y lámpara de deuterio para una alta sensibilidad, bajos límites de detección con un muy bajo ruido y deriva de la línea base.
  2. Detector de Fluorescencia con una lámpara pulsante de xenón de larga duración que se estabiliza en microsegundos; ello reduce costes al permitir apagarla cuando no se están adquiriendo datos.

Además, el sistema dispone de un colector de fracciones nos permite recuperar los analitos separados y detectados por el HPLC, con el mínimo volumen muerto posible para evitar la dispersión de los picos. El equipo nos permite seguir la trazabilidad de las distintas muestras y sus fracciones, pudiendo seleccionarlas por tiempos de retención, por picos o masa de analito de las fracciones requeridas.

 

 

Responsable: Fatima Domínguez Timón - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

FORMULARIO DE RESERVA

 

ASE 350 Accelerated Solvent Extractor

El ASE® 350 Accelerated Solvent Extractor (ver Figura 1-1) es un sistema automatizado para extraer compuestos orgánicos de una variedad de muestras sólidas y semisólidas. La vía interna de DioniumTM permite la extracción de muestras ligeramente ácidas o básicas.


El ASE 350 utiliza una combinación de temperatura y presión elevadas con disolventes comunes para aumentar la eficiencia del proceso de extracción. El resultado es tiempos de ejecución más rápidos y una reducción significativa en el uso de disolventes. Para reducir aún más el uso de disolventes, el ASE 350 admite un método de extracción único llamado modo de ahorro de disolventes.


Hay dos opciones de ahorro de solventes:

  1. El modo PRESS es un modo estático de extracción que minimiza el uso de disolventes manteniendo una presión celular fija y eliminando la introducción de disolvente fresco durante el calentamiento y los ciclos estáticos. Este modo utiliza menos disolvente que cualquier otro modo de extracción ASE 350.
  2. El modo FLOW es un modo de extracción dinámica continua en el que se entregan pequeñas alícuotas de disolvente a la celda a la velocidad de flujo especificada a lo largo del paso estático. La temperatura de la celda permanece constante durante toda la extracción.

Se recomiendan métodos ahorradores de disolventes para:

  1. Modificación y mejora de los métodos de extracción existentes
  2. Explorar nuevos métodos de extracción
  3. Simular la extracción a pequeña escala antes de escalar a un módulo de extracción a escala de planta.

Durante una extracción, la celda se llena con disolvente, luego se calienta y presuriza para mantener el disolvente en estado líquido. Después de la extracción, el extracto se eluye de la celda en un recipiente de recolección (un frasco o vial). Si se utilizan adsorbentes en la celda de muestra, es posible que no sea necesario el lavado posterior a la extracción. Si no se utilizan adsorbentes, puede ser necesario el lavado.

Theory of ASE


Responsable: Inmaculada Gude Rodríguez - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Supervisor científico: Stephan Pollmann - Catedratico/a de Universidad
stephan.pollmann@upm.es 910679143 ( 134 )

 

 

Sistema GC-QqQ-MS/MS (SCION TQ)

El sistema GC-QqQ-MS/MS es un espectrómetro de masas con triple cuadrupolo unido a un cromatógrafo de gases. Con su alta precisión y resolución en el cálculo de masas, este equipamiento permite la determinación de analitos de 50 a 600D que se puedan volatizar. La unidad de bioanálisis dispone de protocolos para la determinación de las hormonas vegetales: ácido abscísico, ácido 3-idolacético, ácido jasmónico, y ácido salicílico. Para otras determinaciones, consultar previamente.

 

El equipo consta de:

Fuente de Iones


En la fuente de iones, los componentes de la muestra se exponen a condiciones que generan iones. Estas condiciones pueden ser lo suficientemente suaves o severas como para fragmentar moléculas.

 

  1. Ionización Electrónica: es la técnica de ionización tradicional en GC/MS y es adecuada para todos los compuestos en fase gaseosa.
  2. Ionización Química: es una buena estrategia cuando no se observa ningún ion molecular en la ionización electrónica y para confirmar la relación masa-carga del ion molecular.

Analizador de Masas

Los iones salen de la fuente de iones y entran en el analizador de masas. Consta de cuatro partes:

  1. La primera sección proporciona la colimación del haz de iones y la sincronización de los iones con el campo del cuadrupolo. Esto proporciona un flujo de iones más enfocado que mejora la sensibilidad, elimina neutrales y reduce el ruido.
  2. La segunda separa los iones según su relación masa-carga.
  3. La tercera puede trabajar en dos modos:
    1. En el modo MS/MS, se utiliza como una celda de colisión o de gas para proporcionar una fragmentación adicional del ion o los iones precursor(es) que han sido filtrados. Los fragmentos generados se dirigen a la siguiente etapa de filtrado.
    2. En el modo MS, se utiliza como un cuadrupolo de transmisión para enviar iones hacia el detector. Los neutrales se pierden para reducir el ruido.
  4. En la última sección se separan los iones según su relación masa-carga. Los iones se mueven desde aquí hacia el detector.
Los iones positivos y negativos pueden detectarse con eficiencia similar.



Responsable: Fatima Domínguez Timón - Técnico/a
bioanalisis.cbgp@upm.es 910679185 ( S51)

 

Supervisor científico: Antonio Molina Fernández - Catedratico/a de Universidad
antonio.molina@upm.es 910679213 - 910679201 ( 235)

 

 

Sistema de cromatografía de baja presión BioLogic LP (Bio-Rad)

Este es un equipo adecuado para la separación de proteínas mediante técnicas cromatográficas convencionales de tipo intercambio iónico, filtración en gel, etc. El sistema incluye una bomba peristáltica capaz de proporcionar flujos de 0.1-40 mL/min hasta una presión máxima de 30 psi (2 bares). Además incluye un mezclador de gradiente capaz de utilizar dos tampones simultáneamente y un recolector de hasta 80 fracciones.