Responsable Científico: Pablo González-Melendi de León

pablo.melendi@upm.es 910679169 / 910679107 ( Lab Microscopía )

 

Personal:

Personal técnico: Alonso Ramos, Paula - Técnico/a


Buzón de quejas, sugerencias y felicitaciones


Tarifas y carta de servicios


actualmente, el servicio de microscopía del CBGP dispone de equipos para la inclusión y corte de muestras en parafina, vibratomo así como estereomicroscopios y microscopios de fluorescencia equipados con cámaras CCD y dos microscopios confocales. El equipamiento se somete a una renovación periódica con objeto de incluir la tecnología más puntera. Casi todo el equipamiento se encuentra en la ubicación principal del laboratorio, aunque por cuestiones de espacio algunos equipos están en otras salas del CBGP.

 

Más específicamente, el laboratorio de microscopía del CBGP cuenta con el siguiente equipamiento


  1. Microtomo de rotación Leica HistoCore NANOCUT R (planta sótano).
  2. Vibratomo Leica VT1200 S (planta sótano).
  3. Dispensador de parafina Leica EG 1110 (planta sótano).
  4. Horno de hibridación Amersham (planta sótano).
  5. Microscopio vertical con fluorescencia Zeiss Axiophot (con cámara) (planta sótano).
  6. Microscopio vertical con fluorescencia Leica DM2000 (con cámara) (primera planta).
  7. Microscopio vertical Nikon Labophot-2 (segunda planta).
  8. Estereomicroscopio Leica MZ10 F (con cámara) (planta sótano).
  9. Estereomicroscopio Leica M205FA (con cámara) (planta sótano).
  10. Estereomicroscopio Leica MZ95 (primera planta).
  11. Cámara CCD NightOwl LB 983 NC100 Berthold con luminiscencia (segunda planta).
  12. Luminómetro Varioskan lux (planta sótano).
  13. Microscopio espectral invertido Leica TCS SP8 (planta sótano).
  14. Microscopio espectral directo Zeiss LSM 880 (planta sótano).

Microscopio confocal invertido Leica TCS-SP8

Microscopio confocal vertical con superresolución Zeiss LSM 880 con fast Airyscan

 

En estas instalaciones se pueden realizar las siguientes técnicas


  1. Preparación y corte de bloques de parafina en microtomo y vibratomo.
  2. Microcopía de fluorescencia: Fluorescencia es un proceso de absorción de un fotón y posterior emisión de otro fotón de menor energía (longitud de onda más larga) por una molécula (fluoróforo). La epifluorescencia convencional combina una fuente de luz blanca potente con filtros y espejos ópticos para separar distintos haces de luz y para tener especificas longitudes de onda de excitación y detección para cada fluoróforo. Usando técnicas de marcaje podemos combinar diferentes fluoróforos para marcar estructuras celulares (tipos celulares) y subcelulares (membrana plasmática, núcleo, etc.).
  3. Microscopía confocal: El microscopio confocal es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el contraste y poder realizar finos cortes ópticos con la posibilidad de reconstrucción de imágenes tridimensionales. Estos equipos se utilizan principalmente tanto para las muestras marcadas con fluorescencia, como existe la posibilidad de utilizar la luz refractada: dientes, huesos, también son buenos candidatos para su uso con la técnica del microscopio confocal.
  4. Microscopía de campo claro: La microscopia de campo claro está basada en la transiluminación de muestras desde una fuente de luz blanca, enfocado por un condensador para traspasar la muestra hasta llegar a la lente del objetivo que recoge la luz para su visualización en los oculares o adquisición con una camera digital. Es una técnica útil para visualizar células, tejidos, cortes histológicos con marcaje colorimétrico, tanto en animales modelos (pez cebra, C. elegans) como en plantas modelo (Arabidopsis thaliana). Contraste de fases y de Nomarkski son modalidades de visualización de campo claro usando lentes y elementos ópticos específicos para mejorar el contraste de estructuras que de otras formas serían invisibles.
  5. Tinciones histoquímicas: Identificación de un constituyente de un tejido in situ mediante una reacción antígeno-anticuerpo específica visualizada con un marcador coloreado.
  6. Captación de imágenes de bioluminiscencia.

 

El personal del laboratorio de microscopía ofrece a los usuarios los siguientes servicios: entrenamiento en el uso del equipamiento del laboratorio, preparación de muestras, captación de imágenes. Además, realiza de forma rutinaria las labores de mantenimiento y limpieza de los equipos.

 

En estas instalaciones se pueden realizar los siguientes ensayos (entre otros)


  1. Análisis de diferenciación de tipos celulares en tejidos vegetales y animales.
  2. Detección de la presencia de patógenos y localización celular de los mismos.
  3. Optimización de sensores biológicos para la monitorización de procesos biológicos.
  4. Localización subcelular de proteínas.
  5. Marcaje de diferentes tipos celulares.
  6. Análisis anatómico de tejidos vegetales y animales.

 

Por tanto, se utilizan muestras vivas de microorganismos, y de tejidos/líneas celulares de plantas y de animales.
 
No se dispone de normas o procedimientos validados por organismos externos. Sin embargo, para utilizar los equipos del servicio por primera vez usuarios deben hacer un curso impartido por el personal del servicio (consultar fechas).
  

El programa Fiji para análisis y procesado de imágenes se puede descargar pinchando Aquí.

 


Microtomo de rotación Leica HistoCore NANOCUT R
  1. Modo de trabajo automático o manual.
  2. Control mediante un panel ergonómico e independiente.
  3. Portamuestras para inclusiones en parafina y resinas.
  4. Base para cuchillas de acero desechables y de diamante.
  5. Espesor mínimo de las secciones de 0,5 µm.
  6. Portamicroscopio integrado.

 

 

 

 

Vibratomo Leica VT1200 S

  1. Para cortar secciones gruesas de muestras sin incluirpor vibración de la cuchilla (Gillette).
  2. Modo de trabajo automático o manual.
  3. Panel de mandos independiente.
  4. Lupa integrada.

Dispensador de parafina Leica EG 1110

Horno de hibridación Amersham

 

 

  • Filtros para fluorescencia:

Luz de excitación

Filtro de excitación

Espejo dicroico

Filtro de emisión

ultravioleta

BP 365

395

LP 397

azul

450-490

510

LP 520

verde

BP 546

580

LP 590

 

  • Objetivos:

Tipo

Aumento/apertura numérica

Técnica

Inmersión

Plan-NEOFLUAR

2.5x/0.075

 

 

Plan-NEOFLUAR

5x/0.15

 

 

Plan-NEOFLUAR

10x/0.3

 

 

Plan-NEOFLUAR

20x/0.5

DIC*

 

Plan-NEOFLUAR

40x/0.75

DIC*

 

Plan-NEOFLUAR

40x/1.3

contraste de fase

aceite

Plan-NEOFLUAR

63x/1.25

 

aceite

Plan-NEOFLUAR

100x/1.3

 

aceite

 

*DIC: contraste diferencial interferencial

 

La captura de imágenes se realiza con una cámara color CMOS DC.20000i euromex (20 Mpixels).

  • Objetivos:

Tipo

Aumento/apertura numérica

Técnica

Inmersión

E PLAN

10x/0.25

BF 

 

E PLAN

40x/0.65

BF

 

E PLAN

100x/1.25

BF

aceite 

 

  1. iluminación diascópica y episcópica
  2. objetivo planapocromático 1.0x/0.125
  3. aumento del portalentes 0.8x – 8x
  4. filtros para fluorescencia

Bloque de filtros

Luz de excitación

Filtro de excitación

Filtro de emisión

UV

ultravioleta

360/40

420

GFP Plus

azul

460-500

510

GREEN

verde

546/10

590

 
La captura de imágenes se realiza con una cámara CCD color Leica DFC 400C (5 Mpixels.)

 

  • Filtros de fluorescencia:

Bloque de filtros

Luz de excitación

Filtro de excitación

Espejo dicroico

Filtro de emisión

A

UV

BP 340-380

400

LP 425

L5

blue

BP 480/40

505

BP 527/30

N2.1

green

BP 515-560

580

LP 590

 

  • Objetivos:

Tipo

Aumento/Apertura numérica

Técnica

Inmersión

C PLAN

10x/0.22

 

 

C PLAN

20x/0.4

Contraste de fase

 

C PLAN

40x/0.65

Contraste de fase

 

HI PLAN

63x/0.75

 

 

C PLAN

100x/1.25

 

Aceite

 
La captura de imágenes se realiza con una cámara CCD color Leica DFC 300FX (1,4 Mpixels).
  1. Iluminación episcópica
  2. Objetivos 0.5x y 1.0x
  3. Aumento del portalentes 0.63x – 5.7x
  4. Bloques de filtros para fluorescencia

 

Bloque de filtros

Luz de excitación

Filtro de excitación

Filtro de emisión

UV

ultravioleta

400-440

475

GFP

azul

460-490

510

  1. Iluminación episcópica
  2. Objetivo PLAN 1.0x
  3. Aumento del portalentes 0.63x – 6x

 

Captura imágenes de bioluminiscencia, quimioluminiscencia y fluorescencia (filtro para GFP).
  1. resolución 1024 x 1024 px
  2. rango de sensibilidad de 300 a 1050 nm
  3. eficiencia cuántica (QY) del 90% a 620 nm
  4. rango dinámico de 82 dB

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  1. panel externo para el control y manejo de todas las funciones motorizadas
  2. iluminación episcópica mediante dos guías de luz semirrígidas con lámpara de LED
  3. base de luz transmitida con tres tipos de iluminación: campo claro, contraste de Rotermann y campo oscuro
  4. objetivo apocromático 1X: apertura numérica 0,17 y distancia de trabajo 61,5 mm
  5. objetivo apocromático 2X: apertura numérica 0,35 y distancia de trabajo 20,1 mm
  6. zoom motorizado con aumento variable entre 0,78X y 16X (rango total 20,5)
  7. ruta de fluorescencia motorizada
  8. Filtros para fluorescencia:

 

Bloque de filtros

Luz de excitación

Filtro de excitación

Filtro de emisión

DAPI

ultravioleta

350/50

460/50

GFP

azul

470/40

525/50

mCherry

verde

560/14

630/75

 

Características:

  1. Sensor CMOS FL-400
  2. Número de pixels: 2048 x 2048
  3. Área efectiva: 13,312 mm x 13,312 mm
  4. Velocidad: 30 frames/s a máxima resolución
  5. Eficiencia cuántica (QY) > 70% at 600 nm
  6. Binning digital 2x2 / 4x4

 

Consta de los siguientes elementos:

 

  1. Pantalla táctil integrada en el estativo para el control de todas las funciones del microscopio

  2. Iluminación CoolLed pE300 ULTRA

  3. Autofoco Leica AFC (Adaptive Focus Control)

  4. Filtros para fluorescencia:

     

Tipo

Fluorocromo

Filtro de excitación

Espejo docroico

Filtro de emisión

LED 405

DAPI, BFP

405/60

455

470/40

FITC/TXR

CFP, GFP

mCherry

455/50

560/40

495

595

520/40

635/65

 

  • Objetivos:

Tipo

Aumento/apertura numérica

Inmersión

Cubreobjetos (mm)

Técnicas *

HC PL Fluotar

5x/0.15

 

 

BF, Pol, DIC, FLUO

HC PL Fluotar

10x/0.32

 

0.17

BF, Pol, DIC, FLUO

HC PL Fluotar

20X/0.55

 

0.17

BF, Pol, DIC, FLUO

HC PL Fluotar

40x/0.80

 

0.17

BF, Pol, DIC, FLUO

HC PL APO

63X/1,40

aceite

0.17

BF, FLUO


*BF = campo claro, DIC = contraste diferencial interferencial, Pol = Polarización, FLUO = Fluorescencia

 

Platina motorizada XY:

  1. max. velocidad: 120 mm/s

  2. rango: 130 x 85 mm

  3. resolución: 0,05 µm

Platina motorizada Z:
  1. paso: 10 nm
  2. rango: 12 mm
  3. cuatro velocidades: para el mando macrométrico y 2 para el micro

Características:

  • tecnología Electron Multiplying Back Thinned Transfer CCD
  • chip de 512x512 píxeles con un tamaño de 16x16 μm
  • velocidad de lectura de la imagen completa de70 fps
  • binning 1x1, 2x2 y 4x4
  • ganancia EM (electron multiplying) entre 1 y 1200x
  • Eficiencia cuántica (QY) > 90%
  • ganancia analógica entre 0,5x y 1x para modo EM y entre 1x y 5x para modo no EM
  • refrigeración por aire (-65ºC) y agua (-80ºC)
  • digitalización de 16 bits

 

  1. panel de control mediante pantalla táctil incorporada en el estativo

  2. lámpara de metal haluro de 120 W

 

Filtros para fluorescencia:

Bloque de filtros

Luz de excitación

Filtro de excitación

Filtro de emisión

DAPI

ultravioleta

356

BP 455/50

GFP

azul

BP 470/40

BP 525/50

DsRed

verde

BP 530-585

LP 615

 

 
Objetivos:

Tipo

Aumento/apertura numérica

Técnica*

Inmersión

Plan-Apochromat

10x/0.45

BF,FLUO

 

Plan-Apochromat

25x/0.80

BF,DIC,FLUO

agua,glicerol,aceite

W N-Achroplan

40x/0.75

BF, FLUO

agua

Plan-Apochromat

40X/1.2

BF,DIC,FLUO

agua, glicerol, aceite

Plan-Apochromat

63x/1.4

BF,DIC,FLUO

aceite

 

*BF = campo claro, DIC = contraste diferencial interferencial, FLUO = Fluorescencia

 

Cámara CCD Axiocam 503 color
  1. pixels: 1936 x 1460
  2. tamaño de pixel: 4.54 μm x 4.54 μm
Módulo confocal

 

Láseres

  1. 405, 488, 458, 514, 561 and 633 nm

Detectores

  1. 3 PMTs espectrales
  2. Airyscan para superresolución
  3. 1 PMT para luz transmitida

Platina motorizada XY

  1. velocidad: 100 mm/s
  2. resolución: 0,1 µm
  3. reproducibilidad <1 µm

Platina motorizada Z

  1. rango: 500 μm
  2. velocidad: 5 mm/sec
  3. reproducibilidad: +/- 5 nm

Software

  1. ZEN black: adquisición de imágenes
  2. ZEN blue: image processing (3D, colocalización)


Luminómetro para realizar cribados de experimentos de inmunofluorescencia (simples o dobles marcados) con objeto de seleccionar muestras positivas con señal de fluorescencia para su posterior observación y análisis en el microscopio confocal.


Características técnicas:

 

  1. Fluorescencia y Luminiscencia.
  2. FRET, TR-FRET y BRET.
  3. Rango de longitud de excitación: 200-1000 nm
  4. Rango de longitud de emisión: 270-840 nm
  5. Microplacas de 6 a 384 pocillos.
  6. Agitación orbital.
  7. Control de temperatura de 4 a 45°C.

 

Microscopio invertido automático Leica DMI6000CS 

 

  1. panel de control táctil STP6000

  2. smart move: consola para mover la platina en XY y Z 

  3. fuente de luz de fluorescencia Leica EL6000, con lámpara de metal haluro de 120 

  4. Filtros para fluorescencia:

Bloque de filtros

Luz de excitación

Filtro de excitación

Espejo dicroico

Filtro de emisión

A4

ultravioleta

BP 360/40

400

BP 470/40

CFP

violeta/azul

BP 436/20

455

BP 480/40

GFP

azul

BP 470/40

500

BP 525/50

I3

azul

BP 450-490

510

LP 515

N2.1

verde

BP 515-560

580

LP 590

 

  • Objetivos:

Tipo

Aumento/apertura numérica

Técnica*

Inmersión

PL APO CS

10x/0.4

BF,FLUO

 

PL APO CS

20x/0.70

BF,FLUO

 

PL APO CS2

20X/0.75

BF,DIC,FLUO

agua, glicerol, aceite

PL APO CS2

40x/1.1

BF,DIC,FLUO

agua

PL APO CS2

63x/1.4

BF,DIC,FLUO

aceite

 

*BF = campo claro, DIC = contraste diferencial interferencial, FLUO = fluorescencia

 

Módulo confocal

 

Sistema de barrido FOV: 
  1. velocidad hasta 1.800 Hz (3.600 Hz en modo bidireccional)
  2. hasta 7 fps @ 512 x 512 píxeles
  3. formato de imagen hasta 8.192 x 8.192 píxeles
Láseres: 
  1. CW (405 nm). 50 mW
  2. Ar (458, 488 y 514 nm). 100 mW
  3. DPSS (561 nm). 20 mW
  4. He-Ne (633 nm). 10 mW
Detectores: 
  1. 4 espectrales para fluorescencia y reflexión (2 PMT y 2 HyD)
  2. 1 (no confocal) para luz transmitida
Divisor de haz LIAchroic que incluye los siguientes dicroicos: 
  1. substrate (405)
  2. 488/561/633
  3. 458/514/561
  4. 476/488
  5. RT 15/85 (reflexión)
  6. 488/561
Platina galvanométrica super Z: 
  1. paso mínimo 20 nm
  2. rango de recorrido 1500 µm
Platina motorizada de scanning XY: 
  1. velocidad: 10 mm/segundo
  2. resolución 0,02-0,04 µm
  3. reproducibilidad <1 µm

Software 

LAS X con tutorial para análisis de FRET & FRAP y visor 3D