- Microscopy
- Microtomes and Sample Preparation
- Upright microscope Zeiss Axiophot
- Nikon Labophot-2 vertical
- Stereomicroscope Leica MZ10 F
- Upright microscope Leica DM2000
- Stereomicroscope Olympus SZX9
- Stereomicroscope Leica MZ95
- Spectral confocal microscope Leica TCS-SP8
- NightOwl LB 983 NC100. Berthold
- Stereomicroscope LEICA M205FA for Fluorescence and Bioluminiscence
- High sensitivity Electron Multiplying Hamamatsu ImagEM X2 EM-CCD camera
- Inverted microscope Leica DMi8
- Digital camera Hamamatsu ORCA Flash 4.0 LT
- Super-resolution confocal microscope Zeiss LSM 880 with fast Airyscan
- Luminometer Varioskan LUX
Responsable Científico: Pablo González-Melendi de León
pablo.melendi@upm.es 910679169 / 910679107 ( Lab Microscopía )
Personal:
Personal técnico: Alonso Ramos, Paula - Técnico/a
Box mail of complaints, suggestions and congratulations
actualmente, el servicio de microscopía del CBGP dispone de equipos para la inclusión y corte de muestras en parafina, vibratomo así como estereomicroscopios y microscopios de fluorescencia equipados con cámaras CCD y dos microscopios confocales. El equipamiento se somete a una renovación periódica con objeto de incluir la tecnología más puntera. Casi todo el equipamiento se encuentra en la ubicación principal del laboratorio, aunque por cuestiones de espacio algunos equipos están en otras salas del CBGP.
Más específicamente, el laboratorio de microscopía del CBGP cuenta con el siguiente equipamiento
- Microtomo de rotación Leica HistoCore NANOCUT R (planta sótano).
- Vibratomo Leica VT1200 S (planta sótano).
- Dispensador de parafina Leica EG 1110 (planta sótano).
- Horno de hibridación Amersham (planta sótano).
- Microscopio vertical con fluorescencia Zeiss Axiophot (con cámara) (planta sótano).
- Microscopio vertical con fluorescencia Leica DM2000 (con cámara) (primera planta).
- Microscopio vertical Nikon Labophot-2 (segunda planta).
- Estereomicroscopio Leica MZ10 F (con cámara) (planta sótano).
- Estereomicroscopio Leica M205FA (con cámara) (planta sótano).
- Estereomicroscopio Leica MZ95 (primera planta).
- Cámara CCD NightOwl LB 983 NC100 Berthold con luminiscencia (segunda planta).
- Luminómetro Varioskan lux (planta sótano).
- Microscopio espectral invertido Leica TCS SP8 (planta sótano).
- Microscopio espectral directo Zeiss LSM 880 (planta sótano).
Microscopio confocal invertido Leica TCS-SP8
Microscopio confocal vertical con superresolución Zeiss LSM 880 con fast Airyscan
En estas instalaciones se pueden realizar las siguientes técnicas
- Preparación y corte de bloques de parafina en microtomo y vibratomo.
- Microcopía de fluorescencia: Fluorescencia es un proceso de absorción de un fotón y posterior emisión de otro fotón de menor energía (longitud de onda más larga) por una molécula (fluoróforo). La epifluorescencia convencional combina una fuente de luz blanca potente con filtros y espejos ópticos para separar distintos haces de luz y para tener especificas longitudes de onda de excitación y detección para cada fluoróforo. Usando técnicas de marcaje podemos combinar diferentes fluoróforos para marcar estructuras celulares (tipos celulares) y subcelulares (membrana plasmática, núcleo, etc.).
- Microscopía confocal: El microscopio confocal es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar el contraste y poder realizar finos cortes ópticos con la posibilidad de reconstrucción de imágenes tridimensionales. Estos equipos se utilizan principalmente tanto para las muestras marcadas con fluorescencia, como existe la posibilidad de utilizar la luz refractada: dientes, huesos, también son buenos candidatos para su uso con la técnica del microscopio confocal.
- Microscopía de campo claro: La microscopia de campo claro está basada en la transiluminación de muestras desde una fuente de luz blanca, enfocado por un condensador para traspasar la muestra hasta llegar a la lente del objetivo que recoge la luz para su visualización en los oculares o adquisición con una camera digital. Es una técnica útil para visualizar células, tejidos, cortes histológicos con marcaje colorimétrico, tanto en animales modelos (pez cebra, C. elegans) como en plantas modelo (Arabidopsis thaliana). Contraste de fases y de Nomarkski son modalidades de visualización de campo claro usando lentes y elementos ópticos específicos para mejorar el contraste de estructuras que de otras formas serían invisibles.
- Tinciones histoquímicas: Identificación de un constituyente de un tejido in situ mediante una reacción antígeno-anticuerpo específica visualizada con un marcador coloreado.
- Captación de imágenes de bioluminiscencia.
El personal del laboratorio de microscopía ofrece a los usuarios los siguientes servicios: entrenamiento en el uso del equipamiento del laboratorio, preparación de muestras, captación de imágenes. Además, realiza de forma rutinaria las labores de mantenimiento y limpieza de los equipos.
En estas instalaciones se pueden realizar los siguientes ensayos (entre otros)
- Análisis de diferenciación de tipos celulares en tejidos vegetales y animales.
- Detección de la presencia de patógenos y localización celular de los mismos.
- Optimización de sensores biológicos para la monitorización de procesos biológicos.
- Localización subcelular de proteínas.
- Marcaje de diferentes tipos celulares.
- Análisis anatómico de tejidos vegetales y animales.
El programa Fiji para análisis y procesado de imágenes se puede descargar pinchando Aquí.
Microtome Leica HistoCore NANOCUT R
- Automatic or manual working mode.
- Ergonomic and independent control panel.
- Holders for paraffin-wax and resin embedded specimens.
- Holders for steel and diamond knifes.
- Minimum sectioning thickness 0,5 µm.
- Integrated stereomicroscope.
Vibratome Leica VT1200 S
- Thick sections from non-embedded specimens by blade (Guillete) vibration.
- Automatic or manual working mode.
- Ergonomic and independent control panel.
- Integrated stereomicroscope.
Paraffin-wax dispenser Leica EG 1110
Hybridisation oven Amersham
-
Fluorescence cubes:
Excitation light |
Excitation filter |
Dichroic mirror |
Emission filter |
UV |
BP 365 |
395 |
LP 397 |
blue |
450-490 |
510 |
LP 520 |
green |
BP 546 |
580 |
LP 590 |
-
Objectives:
Type |
Magnification/numerical aperture |
Technique |
Immersion |
Plan-NEOFLUAR |
2.5x/0.075 |
|
|
Plan-NEOFLUAR |
5x/0.15 |
|
|
Plan-NEOFLUAR |
10x/0.3 |
|
|
Plan-NEOFLUAR |
20x/0.5 |
DIC* |
|
Plan-NEOFLUAR |
40x/0.75 |
DIC* |
|
Plan-NEOFLUAR |
40x/1.3 |
phase contrast |
oil |
Plan-NEOFLUAR |
63x/1.25 |
|
oil |
Plan-NEOFLUAR |
100x/1.3 |
|
oil |
*DIC = differential interference contrast
Coupled to colour CMOS camera DC.20000i euromex (20 Mpixels).
-
Fluorescence cubes:
Type |
Excitation light |
Excitation filter |
Dichroic mirror |
Emission filter |
A |
UV |
BP 340-380 |
400 |
LP 425 |
L5 |
blue |
BP 480/40 |
505 |
BP 527/30 |
N2.1 |
green |
BP 515-560 |
580 |
LP 590 |
-
Objectives:
Type |
Magnification/numerical aperture |
Technique |
Immersion |
C PLAN |
10x/0.22 |
|
|
C PLAN |
20x/0.4 |
phase contrast |
|
C PLAN |
40x/0.65 |
phase contrast |
|
HI PLAN |
63x/0.75 |
|
|
C PLAN |
100x/1.25 |
|
oil |
Coupled to colour CCD camera Leica DFC 300FX (1,4 Mpixels).
Inverted microscope Leica DMI6000CS
-
touchscreen STP6000
-
smart move (moves the stage in XY and Z)
-
metal halide bulb EL6000 (120 W)
- Fluorescence clubes:
Type |
Excitation light |
Excitation filter |
Dichroic mirror |
Emission filter |
A4 |
UV |
BP 360/40 |
400 |
BP 470/40 |
CFP |
violet/blue |
BP 436/20 |
455 |
BP 480/40 |
GFP |
blue |
BP 470/40 |
500 |
BP 525/50 |
I3 |
blue |
BP 450-490 |
510 |
LP 515 |
N2.1 |
green |
BP 515-560 |
580 |
LP 590 |
-
objectives:
Type |
Magnification/numerical aperture |
Technique* |
Immersion |
PL APO CS |
10x/0.4 |
BF,FLUO |
|
PL APO CS |
20x/0.70 |
BF,FLUO |
|
PL APO CS2 |
20X/0.75 |
BF,DIC,FLUO |
water, glycerol, oil |
PL APO CS2 |
40x/1.1 |
BF,DIC,FLUO |
water |
PL APO CS2 |
63x/1.4 |
BF,DIC,FLUO |
oil |
*BF = bright field, DIC = differential interference contrast, FLUO = fluorescence
Confocal module
FOV scanner:
- speed up to 1.800 Hz (3.600 Hz in bidirectional mode)
- up to 7 fps @ 512 x 512 px
- image format up to 8.192 x 8.192 px
Lasers:
- CW (405 nm). 50 mW
- Ar (458, 488 y 514 nm). 100 mW
- DPSS (561 nm). 20 mW
- He-Ne (633 nm). 10 mW
Detectors:
- 4 spectral for fluorescence and reflection (2 PMT and 2 HyD)
- 1 (non-confocal) for transmitted light
LIAchroic beam splitter, which includes the dichroic mirrors:
- substrate (405)
- 488/561/633
- 458/514/561
- 476/488
- RT 15/85 (reflection)
- 488/561
Galvanometric Z-stage:
- min. step 20 nm
- range 1500 µm
Motorized XY scanning stage
- speed: 10 mm/s
- resolution 0,02-0,04 µm
- reproducibility
Software
LAS X with wizard for FRET & FRAP analysis and 3D viewer
Bioluminiscence, chemiluminiscence and fluorescence (GFP)
- resolution 1024 x 1024 px
- sensitivity 300 to 1050 nm
- quantum yield (QY) 90% @ 620 nm
- dynamic range 82 dB
- external control panel for motorized functions
- episcopic illumination by upright semirigid LED lamps
- transmitted light base with three types of illuminations: bright field, Rotermann contrast and dark field
- apochromat objective 1X: NA 0,17 y WD 61,5 mm
- apochromat objective 2X: NA 0,35 y WD 20,1 mm
- motorized zoom, magnification between 0,78X and 16X (20,5 range)
- motorized fluorescence route
- Fluorescence cubes:
Type |
Excitation light |
Excitation filter |
Dichroic mirror |
DAPI |
UV |
350/50 |
460/50 |
GFP |
blue |
470/40 |
525/50 |
mCherry |
green |
560/14 |
630/75 |
Features:
- Electron Multiplying Back Thinned Transfer CCD technique
- high frame rate format with 512 x 512 pixels of 16x16 μm
- readout speed of the full image 70 fps
- binning 1x1, 2x2 and 4x4
- EM (electron multiplying) gain between 1 - 1200x
- Quantum Yield (QY) > 90%
- analog gain between 0,5x and 1x for EM mode and between 1x and 5x for non-EM mode
- air (-65ºC) and water (-80ºC) cooling
- 16 bits imaging
-
Integrated touch screen to control all functions
-
CoolLed pE300 ULTRA illumination
-
Autofocus Leica AFC (Adaptive Focus Control)
-
Fluorescence cubes:
Type |
Dye |
Excitation filter |
Dichro |
Emission filter |
LED 405 |
DAPI, BFP |
405/60 |
455 |
470/40 |
FITC/TXR |
CFP, GFP mCherry |
455/50 560/40 |
495 595 |
520/40 635/65 |
-
Objectives:
Type |
Magnification/N.A. |
Immersion |
Coverslip (mm) |
Techniques * |
HC PL Fluotar |
5x/0.15 |
|
BF, Pol, DIC, FLUO |
|
HC PL Fluotar |
10x/0.32 |
0.17 |
BF, Pol, DIC, FLUO |
|
HC PL Fluotar |
20X/0.55 |
0.17 |
BF, Pol, DIC, FLUO |
|
HC PL Fluotar |
40x/0.80 |
0.17 |
BF, Pol, DIC, FLUO |
|
HC PL APO |
63X/1,40 |
oil |
0.17 |
BF, FLUO |
*BF = bright field, DIC = differential interference contrast, Pol = polarisation, FLUO = fluorescence
XY motorized stage:
-
max. speed: 120 mm/s
-
range: 130 x 85 mm
-
resolution: 0,05 µm
- step: 10 nm
- range: 12 mm
- four speeds: 2 coarse, 2 fine
Features:
- CMOS sensor FL-400
- effective number of pixels: 2048 x 2048
- effective area: 13,312 mm x 13,312 mm
- frame rate: 30 frames/s a máxima resolución
- quantum yield (QY): over 70% at 600 nm
- digital binning 2x2 / 4x4
-
touch screen to control all functions
-
metal halide lamp (120 W)
Fluorescence cubes:
Type |
Excitation light |
Excitation filter |
Emission filter |
DAPI |
UV |
356 |
BP 455/50 |
GFP |
blue |
BP 470/40 |
BP 525/50 |
DsRed |
green |
BP 530-585 |
LP 615 |
Objectives:
Type |
Magnification/numerical aperture |
Technique* |
Inmersión |
Plan-Apochromat |
10x/0.45 |
BF,FLUO |
|
Plan-Apochromat |
25x/0.80 |
BF,DIC,FLUO |
water, glycerol, oil |
W N-Achroplan |
40x/0.75 |
BF, FLUO |
water |
Plan-Apochromat |
40X/1.2 |
BF,DIC,FLUO |
water, glycerol, oil |
Plan-Apochromat |
63x/1.4 |
BF,DIC,FLUO |
oil |
*BF = bright field, DIC = differential interference contrast, FLUO = fluorescence
CCD camera Axiocam 503 colour
- pixels: 1936 x 1460
- pixel size: 4.54 μm x 4.54 μm
Confocal module
Lasers
- 405, 488, 458, 514, 561 and 633 nm
Detectors
- 3 spectral PMTs
- Airyscan detector for super-resolution
- 1 PMT for transmitted light
Motorized XY scanning stage
- speed: 100 mm/s
- resolution: 0,1 µm
- reproducibility
Motorized Z stage
- range: 500 μm
- speed: 5 mm/sec
- reproducibility: +/- 5 nm
Software
- ZEN black: image acquisition
- ZEN blue: image processing (3D, colocalisation)
Luminometer to perform screenings of immunofluorescence experiments (single or double labels), in order to select fluorescence-positive samples for subsequent observation and analysis on the confocal microscope.
Specifications:
- Fluorescence and Luminescence..
- FRET, TR-FRET and BRET.
- Excitation length range: 200-1000 nm
- Emission length range: 270-840 nm
- Microplates from 6 to 384 wells.
- Orbital shaking.
- Temperature control from 4 to 45°C.