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Cribado de colecciones de genes con cebos de ADN y proteína para identificar interactores proteicos

Se describe un procedimiento sencillo y directo para el cribado de alto rendimiento de colecciones de genes con cebos de ADN o proteínas.

Investigadores de CBGP (UPM-INIA) del grupo "Estudio de la señalización de giberelinas para mejorar la germinación de semillas y el crecimiento de plantas en condiciones de estrés", proporcionan información detallada y directrices para mejorar la detección de interacciones binarias que involucran ADN y proteínas.
La mayoría de las funciones celulares en organismos vivos dependen de intrincadas interacciones moleculares. En particular, las interacciones entre ácidos nucleicos y proteínas son una parte integral de los mecanismos reguladores que controlan la expresión génica. Los sistemas de uno y dos híbridos de levadura (Y1H/Y2H) han sido ampliamente utilizados por muchos laboratorios para detectar las interacciones ADN-proteína (Y1H) y proteína-proteína (Y2H).
El desarrollo de sistemas de clonación eficientes ha promovido la generación de grandes colecciones de genes (genotecas) para varios organismos. Los análisis funcionales de tales colecciones requieren el establecimiento de protocolos adecuados. En este capítulo, se describe un procedimiento sencillo, robusto y directo para cribados de alto rendimiento de genotecas utilizando cebos de ADN o proteínas que puede ser realizado por una persona con un trabajo mínimo y que no requieren robótica. La escala de dicho procedimiento también puede ampliarse o reducirse y es compatible con varios formatos de genotecas. Por último, también se proporcionan procedimientos para el almacenamiento de levaduras a largo plazo en diferentes formatos.


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Publicación Original:

Sánchez-Montesino, R; Oñate-Sánchez, L. 2018. "Screening arrayed libraries with DNA and protein baits to identify interacting proteins", p. 131-149. In L. Oñate-Sánchez (ed.), Two-Hybrid Systems: Methods and Protocols. Springer New York, New York, NY. DOI: 10.1007/978-1-4939-7871-7_9".

 

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